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间接免疫荧光法检测ANCA

时间:2019.10.29 16:59:19浏览人数:203

一、什么是ANCA

ANCA即抗中性粒细胞胞浆抗体,是以中性粒细胞及单核细胞胞浆成分为靶抗原的自身抗体。1982年 Davies等在节段性坏死性肾小球肾炎的患者血清中发现了ANCA,1985年van der Woude等发现在肉芽肿性多血管炎患者中出现胞浆型ANCA(cANCA),1988年Falk和Jennette报道在系统性血管炎和原发性坏死性新月体型肾小球肾炎患者的血清中发现核周型ANCA (pANCA)。 


随后,研究者使用ELISE发现髓过氧化物酶(MPO)是pANCA的主要靶抗原,蛋白酶3(PR3) 确认为GPA患者cANCA的主要靶抗原。临床实验室检测ANCA及其特异性自身抗体,对相关疾病的诊断、鉴别诊断、分 型、病情监测及预后判断等具有重要的临床意义。


二、ANCA检测的临床应用范围

ANCA作为小血管炎的生物学标志物,主要存在于AAV,如 MPA、GPA及EGPA。临床上通常对疑似AAV患者检测ANCA。


例如:肾小球肾炎,特别是快速进展的肾小球肾炎;肺出血,特别是肺-肾综合征;有系统特征的皮肤型血管炎;多个肺结节;上呼吸道慢性破坏性疾病;长期鼻窦炎或耳炎;声门下气管狭窄;多发性单神经炎或其他周围神经病变;眶后肿块;巩膜炎等 。 


同时,ANCA可存在于炎症性肠病、自身免疫性肝病等其他自身免疫病,也可存在于淋巴瘤、药物诱导性血管炎及感染性疾病。


三、间接免疫荧光法检测ANCA原理

间接免疫荧光法检测ANCA以乙醇和甲醛固定的人中性粒细胞为标准实验基质,同时结合HEP-2细胞实验基质排除抗核抗体(ANA)的干扰。间接免疫荧光法检测ANCA时,血清的稀释方法可根据不同的检测试剂而采用倍比稀释系统,所用二抗应使用荧光素标记的抗人IgG抗体。



四、间接免疫荧光法检测ANCA荧光模型


1、cANCA阳性

乙醇固定的人中性粒细胞胞浆呈现弥散的粗细不一的颗粒荧光,胞浆荧光清晰勾勒出细胞及细胞 核的形态,分叶核间荧光呈现重染(图1A);甲醛固定的中性粒细胞呈现上述一致的荧光染色(图1B)。


cANCA阳性时通常甲醛固定的中性粒细胞基质上的荧光强度强于乙醇固定的中性粒细胞荧光强度, 因此部分患者经治疗后,可能表现为甲醛固定的中性粒细胞荧光染色阳性,乙醇固定的中性粒细胞荧光染色阴性。当ANA阳性时,应注意排除ANA胞浆型荧光的干扰。



2.pANCA阳性

乙醇固定的中性粒细胞呈现典型的核周胞浆带状荧光染色增强,荧光阳性染色主要集中在分叶核周围,形成环状或不规则的块状,带状荧光向细胞核内浸润或不浸润(图2A);甲醛固定的中性粒细胞胞浆呈现弥散,粗细不一的颗粒状荧光,胞浆中的荧光可清晰勾勒出细胞及细胞核的形态,分叶核间荧光呈现重染(图2B)。


pANCA阳性时通常乙醇固定的中性粒细胞荧光强度强于甲醛固定的中性粒细胞荧光强度, 因此部分患者经治疗后,可能表现为乙醇固定的中性粒细胞荧光染色阳性,甲醛固定的中性粒细胞荧光染色阴性。当ANA阳性时,应注意排除ANA胞浆型荧光的干扰。


五、ANCA检测结果临床解读



作者:医学实验—余志宏